Форум Neuroscience.ru - Молекулярная и клеточная нейробиология, биофизика

Цитата:

Последствия точечных аминокислотных замен на сайтах гликозилирования ГАМКА-рецепторов.

ГАМК является одним из тормозных нейротрансмиттеров, а рецепторы к нему - фармакологической мишенью при эпилепсии, повышенной возбудимости и др.неврологических расстройствах, поэтому требуют детального исследования структуры и параметров функционирования.
Роберт Macdonald и коллеги выявили три участка возможного гликозилирования, β2(32), β2(104) и β2(173), (сравнительно генетическим анализом) и, произведя точечные замены а-к , убедились, в правильности своего предположения (электрофоретическая подвижность гликопротеинов увеличилась, за счет уменьшения массы).
В N173 гликан имеет более низкую массу, чем в двух других участков гликозилирования, которые, по результатам гликомического анализа, содержат большее число маннозных остатков и чувствительны к эндо-Нейроминедазе.
Удаление третьего сайта гликозилирования уменьшало общий уровень β2 , что связанно с его ключевой ролью в процессе фолдинга гликопротеина, в котором первые два сайта участия не принимают. Меняя Асп, в общепризнанной последовательности, на глицин, пролин, треонин - установили, что последующие эффекты связанны не с изменением третичной структуры пептида, а с блокадой гликозилирования протеина.
Сайт N104, оказался важным для сборки рецептора и экспрессии их на клеточной поверхности, что не связанно с нарушением функции эндоплазматического ретикулюма. Возможно, субъединица α1 выполняет функцию шаперона при самосборке рецептора.
У первого сайта, N32, была выявлена более низкая способность к гликозилированию, что возможно связано с присутствием серина, а не - треонина в последовательности, блокада гликозилирования поданному сайту не оказывала заметного воздействия на процессы самосборки и мембранную экспрессию рецептора.
Было проведено патч-клайм исследование проводимости модифицированных рецепторов. Выяснено, что рецепторы N173Q были менее чувствительными и менее лабильными по отношению к низким уровням ГАМК и закрывались более быстро, чем рецепторы дикого типа или α1β2 рецепторы (N32Q). Исследование α1β2 (N104Q) не проводилось, ввиду слишком маленьких амплитуд, т.е. непригодных для детального анализа. Мутацию близкую к N32 связывают с эпилепсией..